蛋白酶抑制劑技術(shù)原理和分類(lèi)

     蛋白酶抑制劑技術(shù)原理和分類(lèi)
    當(dāng)細(xì)胞破碎的時(shí)候，蛋白水解酶就會(huì)被釋放出來(lái)或被激活，使電泳結(jié)果復(fù)雜化，影響終結(jié)果分析。為了避免這些情況的出現(xiàn)，建議在樣品制備時(shí)盡可能在低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時(shí)應(yīng)當(dāng)使用蛋白酶抑制劑。因此對(duì)于我們想要研究的蛋白來(lái)說(shuō)，選擇性和有效的抑制這些蛋白酶對(duì)于蛋白純化路線設(shè)計(jì)來(lái)說(shuō)顯得尤為重要。
    在與蛋白相關(guān)的檢測(cè)中，首先關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過(guò)程中，蛋白水解酶就會(huì)被釋放出來(lái)或被激活，影響終的結(jié)果。為了避免這些情況的出現(xiàn)，可以在樣品制備時(shí)盡可能低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在pH9以上就失活了，因此Tris-base，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時(shí)，我們可以通過(guò)加入各種蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)的降解。
    根據(jù)催化中心結(jié)構(gòu)的不同蛋白酶可分為以下4類(lèi)：
    1、絲氨酸蛋白酶
    在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸，如糜蛋白酶、彈性蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、凝血酶、枯草桿菌蛋白酶、胰酶等。
    2、半胱氨酸蛋白酶（又稱(chēng)硫醇或SH蛋白酶）
    在其催化中心含有半胱氨酸，如鈣蛋白酶、組織蛋白酶B/C/L、木瓜蛋白酶等。
    3、天（門(mén)）冬氨酸蛋白酶（羧基蛋白酶）
    在其活性中心含有天（門(mén)）冬氨酸，如組織蛋白酶D、木瓜蛋白酶、腎素等。
    4、金屬蛋白酶
    在其催化中心含有金屬離子，如氨基肽酶、羧基蛋白酶A/B、嗜熱菌蛋白酶等。
    除了蛋白酶抑制劑以外，在許多研究過(guò)程中，尤其是一些制藥公司和研究院所在研究藥理學(xué)機(jī)理的時(shí)候，需要了解蛋白磷酸化途徑，因此一個(gè)重要的步驟就是準(zhǔn)確的觀察一般和特異的磷酸化狀態(tài)，所以蛋白抽提的另一個(gè)重要保護(hù)過(guò)程就是對(duì)磷酸化狀態(tài)的有效保護(hù)。