胎牛血清注意事項(xiàng)及細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成

　　小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?
　　來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
　　組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。
　　血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
　　細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
　　一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。
　　如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
　　(1)細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸;
　　(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;
　　(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長;
　　(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);
　　(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。
　　細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?
　　(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
　　(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
　　(3) 培養(yǎng)基保持*佳PH值7.0- 7.2。
　　(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
　　(5) 掌握細(xì)胞傳代的*佳時機(jī)，細(xì)胞切勿生長過老。